脂质体2000转染细胞实验材料及操作步骤

 

1、Vero细胞

 

2、转染级质粒

 

3、DMEM细胞培养液：无血清DMEM、10%血清DMEM

 

4、脂质体2000

 

5、6孔细胞培养板

 

二、脂质体2000转染细胞实验操作步骤：（以6孔板为例予以说明）

 

1、细胞铺板：转染前一天进行铺板，第二天待细胞长成单层即可进行转染。（Vero细胞按一传三的比例进行传代，一般10~12h即可。）

 

2、溶液1：240ul无血清DMEM+10ullipofectamine2000perwell（总体积250ul）（温育5min）

 

3、溶液2：无血清DMEM+4ug质粒perwell（总体积250ul）（根据质粒浓度确定DMEM的体积，但保证总体积为250ul）

 

4、将溶液1与溶液2混合，室温下置20min。

 

5、与此同时，将6孔板中的细胞用无血清DMEM冲洗细胞两遍后，加入1.5ml无血清培养基。

 

6、将溶液1与溶液2的混合液逐滴加入孔中，摇动培养板，轻轻混匀。在37℃、5％的CO2培养箱中培养5~6小时。

 

7、6小时后，更换10%血清的DMEM，在37℃、5％的CO2培养箱中培养48~72h检测转染水平。