CCK8试剂盒日本同仁常见问题解答(二)

 　　上篇文章，我们已经介绍了一部分CCK8试剂盒日本同仁的常见问题，本文将继续为大家讲解。

　　1、实验之前，是否需要先检测一下培养基和CCK-8是否会反应?建议使用一个孔作一下检测，因为有培养基中可能含有氧化还原反应的物质，在正式实验之前有必要先确认培养基和CCK-8是否反应。一般正常在的OD值应该在0.4以下。

　　2、如果加入的药物中含有金属，是否会有影响?金属对CCK-8显色有影响。当终浓度为1 Mm的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度是10 Mm的话，将会100%抑制。

　　3、CCK8试剂盒日本同仁试剂的保存条件?在避光条件下CCK-8试剂在4℃可保存一年。如果需要保存较长时间的话，推荐在-20℃下保存。但是CCK-8若反复解冻和冰冻将会增加空白吸收，从而影响检测结果，若经常使用可将试剂存放在4℃冰箱内保存。

　　4、如何减少由于CCK-8试剂在枪头上或孔壁上的残留所带来的误差?可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样。

　　5、CCK8试剂盒日本同仁是什么颜色?应该是粉红色。若颜色不一样，有可能会影响测定。

　　6、设定参比波长的目的是什么?必须设定吗?不一定要设定。CCK-8试剂在参比波长没有吸光度。设定参比波长的目的是为了取出由于样品混浊所带来的吸收。

　　7、说明书上仅写了96孔板的测定方法，如果使用24孔板货12孔板，应该加多少量CCK-8试剂?一般情况下建议加入CCK-8试剂的量是培养基体积的1/10。

　　8、在CCK-8显色过程中，如何终止反应?有一下几种方法(96孔板)： 1、 在显色反应后，将培养板放置4℃冰箱内。 2、 每孔加10 μl 0.1 M HCL溶液。 3、 每孔加10 μl 1%(w/v)的SDS(十二烷基硫酸钠)溶液。注意：反应停止后，应在24小时之内测定。

　　9、必须预培养细胞吗?不一定。如果要向保持细胞的状态，建议预培养细胞。如果不做细胞预培养，细胞内的脱氢酶可能会不稳定。也有人不做细胞预培养，但在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。

　　10、预培养后，更换培养基需要细胞计数吗?一般情况下用胰蛋白酶处理对数增长期的细胞，用血球计数盘计数，制备成一定浓度的细胞悬液即可。如果想要精密计数细胞的话，可以预培养后取培养基用血球计数盘进行计数。

　　11、CCK8试剂盒日本同仁对于不同的细胞，灵敏度是否一样?不一样，悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于贴壁细胞，一般加入CCK-8培养1-4小时吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。

　　12、悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别?悬浮细胞由于染色比较困那，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞染色比较容易，若细胞数量过大，有时吸光度会超过酶标仪的读数。

　　13、应该每次做标准曲线吗?建议每次做。虽然细胞是一样的，但是细胞的状态不一定一样，对于状态不一样的细胞，建议每次做标准曲线。如果试剂的批号不一样，灵敏度可能会有轻微的差异，对于不同的批号建议分别做标准曲线。

　　14、有时在药物作用情况下，细胞已经死亡，但是脱氢酶的活性还在，是否能计算细胞数量?不能。由于CCK8试剂盒日本同仁是通过和细胞内的脱氢酶进行反应间接反映活细胞数量，如果细胞已经死亡，但脱氢酶的活性还在，则试剂测定的细胞数量将会比真实值高，不能真实反映活细胞数量，建议采用别的方法测定。

　　通过两篇文章的介绍，相信可以解决大部分客户对于CCK8试剂盒日本同仁的疑问!