葡聚糖凝胶的手工操作方法

 　　葡聚糖凝胶的手工操作方法：

　　一般刚拿到手的Sephadex G/葡聚糖凝胶为干粉颗粒。用前，可以用20倍体积的双蒸水泡过夜。或者沸水煮2-4个小时。记得补水。这样Sephadex G/葡聚糖凝胶基本就泡好了。

　　葡聚糖凝胶泡好后，将柱子准备好(下筛板装好)，先用水冲洗两次。将凝胶混匀(凝胶浓度要适当，太稀会灌得很慢，而太浓的话容易产生气泡，一般1体积的胶，2-3体积的水就可以)，轻轻倒入柱中，等柱中液面下降一些后，立刻补加，等胶体积灌得差不多时，静置，让胶*沉下后，再小心安置上筛板(上筛板不太好安，但多安几次还是能够安好的。可以先装上筛板浸湿，轻轻斜盖在上口，用吸头压入，关键是不能把气泡挤入。再盖平，此时如果筛板上有小量的胶，可以加水混匀再吸走)。此时不停的加水或者其他的缓冲液，不能让柱子干了，如果干了，前面的工作就前功尽弃了，得重新灌了。

　　如果有条件，可以用蓝色葡聚糖(1mg/ml)检测一下柱子是否灌得均匀。检测方法与样品的过柱方法相同。

　　检测合格后，就可以上样了。样品保证没有沉淀，如果有的话，可以离心或者过滤去除。

　　等上筛板上的液体流完，将合适的样品量(不超过柱体积的1/10为好)全倍加入，自然流干。再加少量缓冲液，如0.5ml或者1ml，等流完再加少量缓冲液，如此三次后，就可以多加，或者一直加懑到柱口。

　　如果下面接了检测器的话就好办，如果没有检测器，而目标样品有颜色，也比较好收集，如果又没有检测器，又没有颜色，可能得分段收集了，这个谁也偷不得懒。

　　等样品收集完，就是冲上20倍柱体积的缓冲液或者水，让小分子物质也流出来，柱子得到再生(这个可以反向冲洗，也就是将柱子倒过来，从出口加入缓冲液，这个可以接一个合适的软管，用一个桡杯接了水放到高处，利用重力自然往下流)。

　　葡聚糖凝胶的再生和保存

　　凝胶层析的载体不会与被分离的物质发生任何作用，因此凝胶柱在层析分离后稍加平衡即可进行下一次的分离操作。但使用多次后，由于床体积变小，流动速率降低或杂质污染等原因，使分离效果受到影响。此时对凝胶柱需进行再生处理，其方法是:先用水反复进行逆向冲洗，再用缓冲溶液平衡，即可进行下一次分离。

　　对使用过的凝胶，若短时间保存，只要反复洗涤除去蛋白质等杂质，加入适量防腐剂即可;若长期保存，则需将凝胶从柱中取出，进行洗涤、脱水和干燥等处理后，装瓶保存。