CCK8试剂盒日本同仁的检测步骤

 　　CCK8试剂盒日本同仁利用了同仁化学研究所(Dojindo)开发的四唑盐——WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)，它在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成水溶性的甲臜染料。CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中;不需要预配各种成分。CCK-8法是用于测定细胞增殖或细胞毒性试验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。CCK-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的橙色甲臜染料能够溶解在组织培养基中，生成的甲臜量与活细胞数量成正比。WST-8法检测细胞增殖、细胞毒性实验的灵敏度比其它四唑盐如MTT, XTT, MTS或WST-1高。由于CCK-8溶液相当稳定，并且对细胞没有毒性，因此可以长时间孵育。

　　CCK8试剂盒日本同仁检测步骤

　　1. 向各孔中加入100 μl细胞悬液。a)

　　2. 在37℃下预孵育培养板。b)

　　3. 向各孔中加入各浓度的待测溶液c)10 μl。

　　4. 37℃下孵育。

　　5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。

　　6. 37℃下孵育1-4小时。e)

　　7. 测定450 nm处的OD值。

　　a) 使用适当的培养基制备50,000-100,000个/ml的细胞悬液。

　　b) 建议使用CO2培养箱guo夜预培养。

　　c) 使用培养基或PBS来制备溶液。

　　d) 如果待测溶液有还原性，测定不含细胞，但含有CCK-8的待测溶液在450 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入CCK-8 ，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的100 μl培养基和10 μl CCK-8进行检测。

　　e) 白细胞可能需要培养较长时间。