想知道如何使用罗氏潮霉素B？看看这些吧

　　罗氏潮霉素B(Hygromycin B)是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，大肠杆菌( Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph)，编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。
 

　　下面让我们一起来了解一下罗氏潮霉素B的的使用步骤吧
 

　　案例一：杀灭曲线确定佳杀死浓度(仅作参考)
 

　　往组织培养级的96孔板内加入未转染细胞，细胞密度约50-200细胞/孔;细胞贴壁之后，往每孔加入含不同浓度(如50-1000μg/mL，至少5个浓度)潮霉素B的200μL新鲜培养基;
 

　　37℃，5% CO2培养箱孵育细胞10-14天;
 

　　培养5-7天后更换新的培养液，培养液内含有相应浓度的潮霉素B;
 

　　10-14天后使用细胞增殖方法如MTT，CCK-8等评估细胞活力;也可以通过检测细胞克隆数或百分比汇合率来确定毒性效应。一般选择在10-14天能够杀死所有细胞的小浓度为筛选浓度。
 

　　2.案例二：筛选稳定转染细胞
 

　　对于贴壁细胞，直接吸去60mm培养皿内的转染细胞培养基，然后加入含有潮霉素B的新鲜培养基5-6ml;对于悬浮细胞，无菌条件250x g,离心10min除去旧的转染细胞培养基，然后悬浮在约5ml的含潮霉素B的新鲜培养基;
 

　　5-7天后，如上方法更换含有潮霉素B的新鲜培养基;
 

　　再孵育细胞5-7天;
 

　　10-14天孵育后，培养体系中只含有能够表达潮霉素B抗性表型的活细胞。因此筛选之后如步骤一，更换不含潮霉素B的新鲜培养基。