你知道无内毒素质粒小提中量试剂盒的操作方法么?

　　你知道无内毒素质粒小提中量试剂盒的操作方法么?不知道没关系，下面让我们一起来了解一下吧。
 

　　1、取50µL新鲜的菌液接种到15-50mL(勿超过50mL)的LB培养基，37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000xg离心10分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
 

　　2、加入2.5mLBufferA1(确保已加入RNaseA)，用移液器或涡流震荡确保**沉淀重新悬浮。
 

　　3、加入2.5mLBufferB1,轻轻地反转5-10次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
 

　　4、加入600µLBufferN3,立即反转5次，用手用力摇晃3-5次充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
 

　　5、将离心管转至高速离心机，在室温下13,000xg离心10分钟(若上清中有白色沉淀，可再次离心)。
 

　　6、定量吸取离心后的上清液至新的15mL管中(避免吸起沉淀)，加入0.1倍体积的EndoCleanBuffer，混匀后冰浴10分钟，其间不时摇匀(若EndoCleanBuffer粘稠难吸，可将枪头剪掉头后再吸取)。
 

　　7、室温下(冰浴取出后务必使溶液温度恢复到23oC以上，否则溶液不分层)13,000xg离心10分钟(也可在2,500xg离心15分钟)。此时溶液分为两层，上层水相含有质粒，下层红色有机相含有。
 

　　8、将上层水相转移至一个新的15mL管中，加入3mL的BufferN3及3mL的100%ethonal，用手用力甩5次以混匀，该混合溶液需要需马上进行过柱吸附操作。
 

　　9、立即转移6.0mL裂解液至带收集管的DNA柱中，室温下>2,500xg离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复此步直至所有的溶液通过DNA柱。
 

　　10、可选:向DNA柱中加入3.0mLBufferKB,室温下>2,500xg离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
 

　　11、向离心柱中加入5mL70%乙醇，室温下>2,500xg离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“11”。
 

　　12、将离心柱放回高速离心机中，室温下>2,500xg开盖离心10分钟，以*去除残留的乙醇。
 

　　13、将离心柱转至一个新的15mL离心管中，向DNA柱膜的正中加入0.5mL的EndofreeElutionBuffer，室温放置1分钟，>2,500xg离心5分钟，以洗脱质粒DNA。若想提高得率，可用洗脱得到的0.5mL的EndofreeElutionBuffer再洗脱一次，收集到新的离心管中。