Cellworld DMEM培养基(低糖)是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基,是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量,同时又分为高糖型(低于4500mg/L)和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长,适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。
DMEM是dulbecco's modified eagle medium的缩写,所以其特点主要包括以下:
(1)氨基酸含量为依格尔培养基的2倍,且含有非必需氨基酸,如甘氨酸等;
(2)维生素含量为依格尔培养基的4倍;
(3)含有糖酵解途径中的重要物质--丙酮酸;
(4)含有微量的铁离子。
Cellworld DMEM培养基(低糖)主要有以下用途:用于成纤维细胞、神经元细胞、内皮细胞、杂交瘤细胞(SP2/0)、表皮喉癌细胞(HEP-2)、Hela(宫颈癌细胞)、CHO(中国仓鼠卵巢细胞)等细胞的培养,用于疫苗企业病毒株的传代培养供后续抗原的制备,用作动物疫病病毒采样及病毒分离和维持液的基础液、免疫治疗用细胞培养基础液以及人病毒分离用生长液及维持液的基础液。
一)准确称量试剂:根据不同的菌类和用途,选择适宜的培养基,培养基所需试剂必须纯净。
二)校正pH值:将称量好的培养基各种成分放入容器内,标记划线,加热溶解,补充水分,测定酸碱度,常用pH6.8~8.0的精密试纸或酸度计测定。用1NNaOH和1NHCl调节pH值到适宜范围内。
三)过滤:将玻璃漏斗置铁架上,再用DMEM低糖(含双抗)纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中,将上述培养基倒入其中过滤至透明。
四)分装:将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内(试管内每支装5mL;三角瓶中装100~150ml),塞好棉塞用牛皮纸包扎好,准备灭菌。
五)灭菌:培养基的灭菌,常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死,但细菌的芽胞有较强的抗热性,须经高压蒸汽灭菌才能达到灭菌的目的。
根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理,即压力越大,蒸汽温度就越高。因此,在同一温度条件下,采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下,菌体吸收水分后,其蛋白质易于凝固变性,因为蒸汽的穿透力强,杀菌效果好。